Cultivos celulares y técnicas estériles

Cultivos celulares y técnicas estériles

Sin trabajar con buenas técnicas estériles, experimentos de cultivo celular pueden ser una pesadilla. La contaminación es común. Hay muchos trámites y pasos que deben tomarse para reducir o eliminar la posibilidad de contaminación mientras se trabaja con las culturas. Practicar buenas técnicas estériles ahorra tiempo, energía y dinero.

Llamas

Mecheros Bunsen son indispensables en el trabajo de laboratorio estéril.

La llama siempre las aberturas de la botella cuando viertes algo de una botella. Esto es no sólo para esterilizar la apertura exterior de la botella, sino crear una corriente de aire caliente que emana de la apertura de la botella. Esta corriente de aire caliente se eleva y empuja lejos caer partículas de polvo o gérmenes que de lo contrario podrían contaminar el contenido de la botella.

Loops de inoculación deben siempre ser flameadas entre usos. Cuando se trabaja con placas de Petri y lazos, tienen un envase pequeño de 100 por ciento de etanol cerca. También tiene una lámpara de la llama de alcohol o mechero Bunsen práctico. Para esterilizar el asa de inoculación, inmersión en etanol y pase a través de la llama. Mantenerla hasta que el fuego se apague en el lazo, luego toque para el agar de la placa de Petri para enfriarlo. Está listo para usar con las células una vez que el bucle no fundir el agar en contacto.

Trabajar bajo una campana de

Siempre trabajar debajo de un gabinete de bioseguridad cuando se trabaja con cultivos celulares. Gabinetes de seguridad biológica difieren de las campanas de flujo laminar ya que el aire se filtra; en campanas de flujo laminar, el aire sólo circula. Aire filtrado plantea un riesgo de contaminación mucho menor para cultivos celulares.

Limpieza de incubadora

Trabaje siempre con una incubadora libre de cultivos contaminados. Si encuentras que un cultivo celular ha sido inoculado con una contaminación bacteriana o una levadura, limpiar la incubadora inmediatamente y no poner cualquier nuevas culturas de células en él. No hay ningún punto en tratar de levadura puede ser un contaminante aerotransportado y contaminación bacteriana se propaga fácilmente por contacto.

Cuando usted limpia una incubadora, autoclave todo removible y limpie el interior con una solución de cloro 10% seguido de un enjuague. Luego limpie abajo dentro de la incubadora con una solución de etanol 70% y deje al aire seco. No olvide apagar el inyector de dióxido de carbono y las alarmas asociadas cuando limpie la incubadora porque la puerta se abrirá por un período prolongado de tiempo.

Filtración estéril

Algunos medios de comunicación pueden esterilizarse en autoclave en un ciclo líquido, como el medio de agar las colonias de la placa de Petri. Otros tipos de cultivo celular, especialmente que contengan proteínas, no deberían ser esterilizadas ya que el calor y la presión de desnaturalizar las proteínas. Estos medios deben ser esterilizados por filtración. Contaminantes que pueden destruir el medio de cultivo celular son más grandes que 0.22 um, por lo que el medio a través de una unidad de filtración desechable de filtrado con un filtro de 0.22 um de poro tamaño representa un medio estéril.

Esterilización en autoclave

Autoclaves están comúnmente compartidos entre los laboratorios.

Cuando autoclave herramientas y recipientes, siempre utilice cinta de autoclave. Cubrir las aberturas del recipiente con papel de aluminio y poner un trozo de cinta de autoclave en la hoja. Cuando líquidos autoclave como el medio de agar o agua, use un ajuste líquido para que no desborde ya que la presión se reduce. Valores líquidos reducen la presión dentro de la autoclave más lentamente que la configuración de secado para que coincida con la lenta disminución de la temperatura. Esto evita que el líquido se derrame por los lados de su contenedor debido a la ebullición. Autoclaves deben establecerse a 151 grados C y se debe ejecutar al menos 15 minutos a esa temperatura.

Etanol

Aunque el etanol es el mismo alcohol en vino, nunca beber etanol de grado laboratorio.

Cuando se trabaja en una zona estéril, siempre tienen una botella de etanol 70% práctico para desinfectar superficies de trabajo y desinfectar los guantes. Para desinfectar un espacio de trabajo, rocíe el área con 70 por ciento de etanol y límpiela con un paño libre de polvo desechable. Para esterilizar los guantes, guantes que llevas del aerosol y frótese las manos como si se estaban lavando. Deje los guantes secar al aire, pero no soplan sobre ellos. Respiración contiene contaminantes. Para acelerar el proceso de secado, puede mantener sus manos sobre la entrada de aire del gabinete de seguridad biológica que está trabajando bajo.

Desechables de uso

Siempre que pueda, utilizar equipo desechable como lazos, separadores, frascos y cajas Petri hace contaminación de un área de trabajo estéril mucho menos probable, aunque tiene los inconvenientes asociados de mayor gasto y más producción de residuos.

Hablando

Salvar a hablar antes o después de procedimientos estériles porque aliento contiene contaminantes.

Aunque a menudo es necesario para explicar un procedimiento o enseñar a alguien sobre lo que estás haciendo cuando trabajas bajo una campana, mantener un mínimo discurso. Si va a hablar en absoluto, use una mascarilla. Trate de escribir lo que harás antes por lo que su audiencia puede seguir sin explicaciones habladas. Solicitar que guarde sus preguntas para después del procedimiento y sugiero que escriban cualquier duda o comentario que piensan mientras trabaja.


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