La diferencia entre Northern Blot y Northern Blot reverso

La diferencia entre Northern Blot y Northern Blot reverso

Los genes en el ADN son como recetas de código. El proceso que convierte la información codificada en un gen en una proteína se denomina expresión génica. Biólogos a menudo necesitan para determinar si un gen se expresa en un tipo determinado de tejido y el nivel de expresión. Dos técnicas para el estudio de expresión génica son borrar norte y atrás el borrar norteño.

El borrar norteño

Inicio de biólogos un Northern blot aislando el ARNm de una muestra de tejido. La manera más conveniente de hacerlo es por medio de la "cola poly-A," una cadena de la adenina (A) nucleótidos en el extremo de una transcripción de mRNA, que es una copia de RNA del gen en el ADN. Una vez que el biólogo ha aislado el mRNA, se separan sobre la base de tamaño usando electroforesis en gel, luego transferencia a una membrana de nitrocelulosa. Se agrega una sonda de DNA monocatenario, y la sonda se adhiera o "hibridar" en una transcripción de RNA complementaria. Porque la sonda está marcada (ya sea con un isótopo radiactivo o una enzima adjuntada), el biólogo puede determinar si la transcripción de RNA de interés presente en la muestra de tejido. Si es así, significa que el gen se expresa.

Revertir el borrar norteño

El borrar norteño inversa se basa en los mismos principios, pero es un poco diferente. La membrana ha sido tratada para que contenga una colección de fragmentos de ADN; Estos fragmentos de DNA son "cDNAs" o copias de ADN de transcritos de RNA. Cuando el biólogo extrae el ARN del tejido, radiactivo es etiquetado y traído en contacto con la membrana, donde se adhieren a o "hibridar" con fragmentos de la DNA que emparejan. La presencia de la sonda radiactiva permite el biólogo determinar si la transcripción del RNA para el gen de interés estaba presente en la muestra de tejido.

Comparaciones

Northern blot y Northern blot reverso son técnicas de análisis de expresión génica, por lo que ambos contestan el mismo tipo de pregunta, aunque con un enfoque diferente. El borrar norteño inversa es más útil en casos donde la cantidad de ARN disponible es más limitada, porque más RNA es necesaria para realizar un Northern blot. En consecuencia, el Northern blot es menos factible si sólo se dispone de pequeñas muestras.

Consideraciones

Tanto el borrar norteño y el borrar norteño inversa son más usados hoy en día, en parte porque las técnicas más eficaces para el análisis de la expresión génica se han convertido en disponibles. Microarrays, por ejemplo, permiso de biólogos para analizar la expresión de muchos genes a la vez, en lugar de un único gen en un momento. El borrar norteño puede utilizarse junto con la transcripción reversa PCR (RT-PCR) para el estudio de expresión génica de genes individuales. RT-PCR es altamente sensible, por lo que también ha desplazado a la inversa Northern blotting en la mayoría de las aplicaciones.


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