Los usos para el borrar norteño

Los usos para el borrar norteño

El borrar norteño fue desarrollado por James Alwine y George Stark. La mancha de "Norte" nombre proviene de una analogía con el blot "Sur" previamente inventado inventado por Edwin Southern. Mientras que un Southen blot mide ADN, un Northern blot detecta RNA. Se realiza en varios pasos y puede utilizarse para comparar cantidades relativas de diversas formas de RNA, detectar el tamaño de un determinado RNA y localizar diferentes formas de un determinado RNA.

Realizar un Northern Blot

El borrar norteño consiste en varios pasos. En primer lugar, el ARN se ejecuta en un gel de agarosa que separa por peso. El RNA entonces se transfiere a una hoja de microcellulose u otra membrana. Esta hoja luego se incubaron con una sonda de ADN complementaria del ARN de interés. La sonda se unirá al RNA. Aunque son invisibles, son radiactivos o ligado a una enzima para que pueda visualizarlos más adelante. Esto le permite entonces visualizar la punta de prueba y directamente localiza el ARN de interés.

Determinar el tamaño de la transcripción

Mediante la ejecución de ARN de tamaños conocidos al lado de su RNA experimental, puede determinar el tamaño de su RNA de interés. El control de RNA se llama una escalera y generalmente viene con un tinte que hace visible a simple vista cuando se ejecuta en un gel. Otras escalas son radiactivos, o pueden ser teñidos con bromuro de etidio para la detección. Comparación de la colocación de su RNA de interés con la escalera le dará una sensación de su peso molecular.

Detección de variantes alternas del empalme

Una sonda correctamente diseñada se unirá a todos RNA que es complementaria a ella. Por lo tanto, si nuestro RNA existe en varias formas, la sonda se unirá todavía a él. Estas diferentes formas, conocidas como empalme variantes, aparecerán como bandas separadas. Variantes de empalme ocurren cuando las transcripciones del RNA son procesadas para eliminar varias regiones. Como el estiramiento de los ácidos nucleicos complementarios se ha mantenido en la transcripción, la sonda se unirá.

Comparación de la abundancia relativa de la transcripción

Si tienes varias muestras, se puede comparar directamente cuánto ARN de interés se encuentra en cada muestra ejecutando el lado a lado. La transcripción más presente, la sonda se unirá, y más oscuro la banda aparecerá tras la detección. De esta manera, puede conseguir una sensación para la cantidad de RNA en una muestra en relación a otro.


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