Así como hay virus que infectan a los seres humanos, también hay virus que infectan bacterias. Los tipos estos últimos se denominan bacteriófagos, del griego para comedores de bacterias. Bacteriófago han jugado un enorme papel en el desarrollo de la biología molecular moderna e incluso han sugerido a veces como una posible forma de tratar las infecciones resistentes a los antibióticos. El ensayo de placa ayuda a los científicos aislar bacteriófago y averiguar cuántos están presentes en una muestra.
Caldo de cultivo
El primer paso en la preparación de un ensayo de placa es crecer un cultivo en caldo bacteriano--preferentemente temprano fase logarítmica (una etapa en la cual las bacterias crecen muy rápidamente). La concentración de las bacterias en el caldo puede determinarse por espectrofotometría (brillando la luz a través de una muestra y medir cuánto se transmite), que permite a los científicos determinar la densidad de las células bacterianas en el cultivo. Una vez listo el caldo de cultivo, se puede preparar el ensayo.
Placa de
El ensayo de placa utiliza una placa de Petri con una capa de agar duro. La placa debe ser mantenida caliente en una incubadora hasta su uso. Mientras tanto, una muestra de las bacterias se mezclan con agar fundido, que se mantiene caliente a 50 grados. El agar fundido ha sido preparado con caldo de Luria u otra mezcla que alimenta las bacterias nutrientes necesitan para crecer. Una solución que contiene el bacteriófago es diluida con solución salina estéril o caldo y luego añadida a la mezcla de bacterias agar derretido. Los científicos vierten la mezcla de agar fundido en la caja Petri alrededor sacuda suavemente para dispersar el agar y luego permitir que el agar se endurezca.
Incubación
Una vez que el agar ha endurecido, la placa puede incubarse a una temperatura tibia para que las bacterias crecerán en la placa. El phage replicar fuera de control dentro de las células bacterianas infectadas estallan células abren o los lyse y luego infectar a otras bacterias a su vez. El crecimiento bacteriano crea un "césped" a través de la placa, que está marcada por manchas claras donde el fago han matado todas las bacterias. Estas manchas claras se llaman placas.
Cuenta y consideraciones
Es importante incubar las placas durante el tiempo adecuado. Mucho tiempo permite a las placas de crecer de tamaño hasta el punto donde se superponen. Contando las placas que se forman, los científicos pueden averiguar phage cuántos estaban presentes en la muestra original. También pueden aislar algunos de los fagos que han crecido desde el agar. Como siempre en microbiología, es importante practicar la técnica estéril adecuada en todo momento a lo largo de este experimento. Contaminando la cultura puede arruinar el experimento.